Histologia - Montagem de lâminas histológicas [1/2]

A montagem de lâminas histológicas permite que tecidos ou mesmo órgãos grandes sejam reduzidos e seccionados de forma a permitir seu estudo e análise nos microscópios ópticos. É fundamento da histologia conhecer os passos, métodos e principais produtos aplicados neste processo. Apresentarei, de modo teórico, todos os passos da preparação, desde a coleta da amostra até a coloração. (Nesse primeiro post, será abordado desde a coleta até a desidratação).

1º passo - Coleta da Amostra (Biópsia):

Consiste em obter o material para o estudo histológico, seja ele uma parte pequena ou grande de algum tecido ou órgão do corpo. Pode-se realizar a coleta de material de estudo por meio de quatro métodos:

     Biópsia Cirúrgica: é o método de se obter o material por meio de uma cirurgia. A incisão é realizada em determinada parte do corpo, e o material desejado é seccionado e coletado.

     Biópsia Endoscópica: utilizada em órgãos ocos (como o estômago e o intestino), é feita com o auxílio de um endoscópio, aparelho que possui uma fonte de luz e uma câmera. O mesmo realiza a coleta de material no interior do órgão.

     Biópsia por agulha (punção): é obtida por punção de um órgão, por meio de uma agulha que perfura a pele e chega até o órgão sem necessitar da abertura do corpo.

     Biópsia Cirúrgica Radical: quando as amostras colhidas correspondem a peças grandes, como órgãos inteiros ou tumores. (Estas peças grandes devem ser clivadas (cortadas) para permitir a penetração fácil dos compostos utilizados nos processos seguintes).

2º passo - Fixação:

Processo que para a autólise tecidual (degradação do tecido), endurece e protege as estruturas moles, preserva os componentes celulares, melhora a diferenciação das estrutures e facilita a coloração. É feita de maneira química na histologia, e consiste na imersão total do material colhido no composto fixador (que na microscopia óptica, o mais utilizado é o Formol à 10%. O tempo necessário varia, mas para peças de 4mm (padrão na histologia com microscopia óptica), o tempo médio é de 12 horas.

É o passo mais importante do processo, e o sucesso da fixação vai garantir a qualidade do material a ser estudado depois. Após coletado, é necessário que seja imediata a submersão do material no fixador.

3º passo - Processamento:

Processo que permite garantir que as estruturas de sustentação das células sejam preservadas, e as células sejam mantidas da mesma forma com que foram colhidas. O composto utilizado é denominado de material de inclusão, e o mais utilizado é a parafina. Para utilizar a parafina, que não é miscível em água, é necessário antes realizar a desidratação do tecido.

4º passo - Desidratação:

Para utilizar a parafina no processamento, é necessário desidratar totalmente a peça histológica. Isso é feito com doses crescentes de álcool etílico, em cinco etapas. Primeiro, a peça é submersa inteiramente em álcool 70%. Após algum tempo, troca-se para álcool 80%, 90%, 96% e conclui-se com álcool 100%. No fim deste processo, a peça estará totalmente desidratada. é importante sempre aplicar o álcool de forma gradual, evitando assim as lesões no material da peça histológica.

Com o material desidratado pelo álcool, continuaremos com os passos finais no próximo post, com a inclusão da parafina, o corte e a subsequente coloração.